Mikropreparáty štírků

Vše o preparování hmyzu.. metody, tipy, rady a pomůcky
Odpovědět
Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 17 pro 2012, 17:48

Protože mě v posledních dnech poptali dva členové na štírky, tak tady dávám aktualizovaný postup (původní byl na starém fóru). Postup je použitelný pro všechny malé brebery, jen je třeba upravit časy, ty uvádím pro průměrného cca 3 mm štírka:
Trvalé mikropreparáty
- uložené jedince z 70% alkoholu nebo 70% alkoholu s 20% glycerolu vyprat v 80% -85% alkoholu (asi 20 - 30 minut)
- - exempláře je třeba srovnat do polohy, v jaké budou v preparátu (levá palpa vrškem, pravá spodkem, nohy co nejdále od sebe), v další fázi ztuhnou a zkřehnou a další manipulace je nemožná
- přibližně 95% alkohol, odvodněný vypálenou modrou skalicí (20 - 30 minut).
- odvodnění ve větší kapce Loctite 7458 (2 - 5 minut), alternativně je možné použít terpinol, xylen nebo aceton v čistotě PA (10 minut)
- odsátí odvodňovacího média malou inj. stříkačkou nebo filtračním papírem (použitá kapka L7458 je opakovaně použitelná až 10x)
- na podložní sklíčko s aktivátorem kapnout kapku lepidla a do ní umístit objekt
- zakrýt krycím sklíčkem s aktivátorem a kapkou lepidla. Bublinky se většinou nevytvářejí, lepidlo je velice řídké. Je třeba pracovat velice rychle, lepidlo začíná polymerovat ve styku s moderátorem a dostupný čas je do 30 sekund!
- preparát je třeba nechat nejméně 10 minut v horizontální poloze (dosažení technické fixace), plná polymerace proběhne během 24 hodin
*** Celý proces odvodnění je možné provádět v malých skleněných embriomiskách nebo na podložních sklíčkách s jamkou zakrytých proti odpařování krycím sklíčkem.
*** Pro manipulaci s krycími sklíčky jsou vynikající plastické lepící čtverečky Henkel PRITT FIX-IT nebo podobné (v papírnictví, pryžovité lepící polštářky na plakáty). Krycí sklíčko s přilepeným válečkem udělaným z půlky válečku se snadno uchopí prsty nebo pinzetou. Na sklíčku ho nechávám jako zátěž do vytvrzení lepidla. Na skle nezanechává žádné stopy, jiné druhy nechávají slabý mastný povrch, snadno se ale čistí např. xylenem.

Používaná kyanoakrylátová lepidla: Loctite 401 nebo Loctite 403 (L401 má nižší viskozitu a má snahu vytékat; vhodné pro preparáty do výšky lepidla 0.15 mm -dostatečné pro většinu evropských druhů, pro vyšší preparáty stačí podložit sklíčka rybářským vlascem, L403 je vhodné na vyšší preparáty až do 0.25 mm bez podložení). Index lomu 1.468 až 1.476. Oba druhy vteřinových lepidel jsou čirá až světle žlutá (v preparátu není zřetelné), po úplné polymeraci se v čase nemění (výrobcem udávaná trvanlivost až 250 let).
Podložní sklíčka v místě preparátu a krycí sklíčka je nutné potřít aktivátorem Loctite 7458, zlepšuje a zrychluje polymeraci uvnitř preparátu. Aktivátor je třeba nechat alespoň 3 minut zaschnout. Je možné připravit sklíčka dopředu, zaschlý aktivátor si zachovává účinnost 12 - 24 hodin.
Při manipulaci s vteřinovými lepidly doporučuju latexové chirurgické rukavice. Není problém se přilepit ke stolu!
V případě potřeby preparát rozmontovat, stačí ponořit přes noc do Loctite Decaploc 55, stejný přípravek se používá na čištění lepidla z nástrojů, stolu a rukou.
Loctite 401 - http://www.loctite.as/?p=productsMore&i ... ve-lepidlo
Loctite 403 - http://www.loctite.as/?p=productsMore&i ... ve-lepidlo
Loctite 7458 - http://www.loctite.as/?p=productsMore&i ... -aktivator
Loctite Decaploc 55 - http://www.loctite.as/?p=productsMore&i ... ni-lepidla

Pokud je třeba exempláře do mikropreparátů odbarvit a projasnit, provádí se to v první fázi:
- odbarvení a projasnění tmavých exemplářů macerací v 10% K2CO3 - ponechat v lázni do odbarvení (12 - 24 hodin). Použití KOH vede zpravidla ke ztrátě trichobotrií a set na těle. Další možností je nasycený roztok KOH v 4% proxydu vodíku (roztok je třeba připravit vždy nový, odbarvení probíhá velmi rychle, 15 -20 minut, někdy se tvoří uvnitř preparátu bublinky :-(. Po odbarvení je třeba vyprat objekt 10 - 15 minut ve vodě s 5% - 10% kyseliny octové a vrátit aspoň na 30 minut do 70% alkoholu (při barvení je s tím třeba počítat! a mírně přebarvovat, zvlášť kongem a metylénovou modří)
- k barvení jsou vhodná barviva a postupy (podle vhodnosti): stříbření, eriochromová čerň, kongo červeň, safranin + světlá zeleň, metylénová modř
- - Stříbření zvýrazní povrchové struktury a sety. Postup je následující:
Potřeby:
lugolův roztok - jodjodkalium (lékárna)
AgNO3 - 10 % roztok
tekutá vývojka AGFA Rodinal (prodává se pod mnoha různými názvy)
destilovaná deionizovaná voda
Postup:
objekt se nechá 10 - 15 minut v lugolove roztoku, opláchne vodou a převede do AgNO3 (ve tmě!) na 15 minut, exponuje se v kapce vody pod silnou žárovkou (expozice ) asi 2 - 5 minut (vyzkoušet !, objekt má být světle šedý), vyvolává se asi 90 vteřin v Rodinalu v ředění 1:3 , promyje se a převede zpět do 70 % alkoholu. Přebarvený objekt se dá zeslabit lugolem.

Dočasné preparáty:
- v kyselině mléčné pod krycím sklíčkem, počkat několik minut do projasnění
- v glycerolu
- - v obou médiích je možné objekty dobarvovat přímo v médiu rozpuštěnou kongo červení nebo metylénovou modří
Po zpracování se objekty bez dalších postupů převedou zpět do 70% alkoholu

V literatuře jsou doporučovaná média pro trvalé preparáty na bázi laktofenolu a chloralhydrátu. Tato média jsou vzhledem ke sklonům ke krystalizaci nevhodná. Jedinou alternativou je klasické zalévání do kanadského balzámu.
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 31 pro 2012, 16:44

Protože už přišlo pár dotazů, tak:
Štírci se sbírají jen do 70% lihu, v silnějším se scvrkávají, jen na genetiku do 100% alkoholu, na sucho jsou téméř neurčitelní.
jak je sbírat, dobře napsal Gerry Legg v Galea: www.britishspiders.org.uk/srs/prg03.html
Štírci se určují podle:
- biometrika - suchý materiál se sechne a nejde měřit - je sada základních měr a biometrických indexů, tzv. Chamberlin Beierova tabulka
- postavení trichobotrií na palpách
- postavení a počet set na hřbetních i břišních článcích prdelky
- přítomost a postavení výrústků na těle
- struktura povrchu palp a hlavohrudi
- počet, velikost a postavení zubů na pohyblivéma nepohyblivém prstu chely
- tvar vnějších genitálií (jsou umístěny na spodku těla stejně jako např u štírů)
Tělní sety a trichobotrie jsou velice křehké a stačí průvan v krabici při otevírání, aby štírky kompletně depiloval. Většina neobisiidů a chthoniidů je za sucha neurčitelná. Suchý scvrklý a depilovaný materiál někdy nejde určit ani do rodu.
Mám je buď v 80% lihu s 20 - 25 % glycerolu nebo v mikropreparátech (postup je v sekci Preparace), většinou rozpreparované - oddělené pedipalpy, jednu zdola, druhou shora, levé nohy a vypreparované pohlavní pole, u některých skupin i ústní ústrojí, jen minimum vcelku.
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Dactylochelifer latreillei na štítku

Příspěvek od tomak » 07 led 2013, 12:22

Tak takhle teda soudruzi ne!
Dostal jsem od Anderse Damgaarda z Dánska takhle nalepeného štírka. Je to v západní Evropě docela vzácný druh, několikrát sbíraný i u nás. Takhle je prakticky neurčitelný. Trichobotrie na palpách pryč, prdelka scvrklá ...
Přílohy
PseudoNaStitku.jpg
Dactylochelifer latreillei
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

marion
Příspěvky: 3590
Registrován: 29 dub 2010, 05:49

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od marion » 07 led 2013, 13:09

Takových taky pár mám (nemyslím druh, ale preparaci), občas se mi nějaký líbí tak ho seberu, hlavně ty velké.
Docela bych ti i nějaké sebral-hlavně z ciziny nebo extrémních biotopů, v prosevech jich často bývá dost, ale odrazuje mně ten požadavek na 70% alkohol, nevím jak poznám koncentraci, nebyla by jiná možnost?
Mám tady v nějakém lihu roztoče, které nikdo nechtěl a mezi nima je nejméně jeden úplně bílý štírek 0,5 mm (hlava-zadeček), lokalita Jelšavská Teplica, "soil washing" štěrku u vyvěračky z jeskynního systému-promýváno cca 0,5-1 m od vody až na vodní hladinu. Mohu přidat k trubičce a donést. Možná je to ale jen nympha-nebo jak se to jmenuje-nevím jak se pozná dospělec.

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 11 led 2013, 10:55

Ředění lihu není nijak kritické. Používám obyčejný laboratorní líh, denaturovaný asi pyrimidiny (nebo jak se to piše), který má mezi 94 - 96% etanolu, zbytek je voda. 3 díly lihu, 1 díl vody. Na přípravu preparátů používám stejný líh, ale vysouším ho vypálenou modrou skalicí (CuSO4 + 5xH2O, vypálením se uvolní krystalová voda, kterou pak skalice jímá z okolí). Dávám do 2.5 litrové PET asi půl kila vypálené skalice a doleju lihem a nechám tak 3-5 dnů odvodňovat. Líh doplňuju tak dlouho, dokud skalice nezačne měnit barvu z bělošedé na světlounce šedomodrou. Skalice se dá znova opakovaně vypálit, jen je třeba jí před vypálením nechat uschnout, nasycená lihem v troubě funguje jako granát, líh blafne ...
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

Uživatelský avatar
Andrej1981
Příspěvky: 48
Registrován: 18 zář 2012, 16:44
Bydliště: Malacky, Slovensko

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od Andrej1981 » 22 led 2013, 11:17

Len teoretická otázka: išlo by tvoj postup alternovať klasickým zaliatim do kanadského balzámu, s predošlým odvodnením vo fenole? Zdá sa mi to jednoduchšie (preparujem takto muchničky, ale robil som týmto spôsobom TP aj z iných skupín /Ephemeroptera, Plecoptera, Crustacea a pod./). Nemám ale žiadnu skúsenosť so štírkami. Keďže fenol aj balzám dosť výrazne prejasňujú, viem si predstaviť, že by sa mohli "stratiť" chlpy ako dôležité determ. znak...

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 25 led 2013, 10:13

Andrej1981 píše:Len teoretická otázka: išlo by tvoj postup alternovať klasickým zaliatim do kanadského balzámu, s predošlým odvodnením vo fenole? Zdá sa mi to jednoduchšie (preparujem takto muchničky, ale robil som týmto spôsobom TP aj z iných skupín /Ephemeroptera, Plecoptera, Crustacea a pod./). Nemám ale žiadnu skúsenosť so štírkami. Keďže fenol aj balzám dosť výrazne prejasňujú, viem si predstaviť, že by sa mohli "stratiť" chlpy ako dôležité determ. znak...
Samozřejmě šlo, používal jsem ho ještě asi před 5 lety (mám po dědovi ještě asi půl kila oxidované kanady zn. Reichert z 30. let :-). Ten postup, který jsem tady popsal mi doporučila Zuzka Hořická z hydrobiologie na PřF UK, je to postup vymyšlený na univerzitě v Leydenu, teda ne můj originál. Je podstatně rychlejší než kanada, udělám tak 60 preparátů za hodinu (bez stříbření, a když mám dobrej den, tak i 80, se stříbřením tak polovinu) a po 20 minutách můžou pod mikroskop. Ethylkyanoakrylát (Loctite 401 = čistý MCA a 403 = MCA s několika hydroxylovými skupinami) jsou naprosto čiré a časem nemění barvu. Metylkyanoakryláty (to jsou ta lepidla za 10 Kč od Vietnamců nebo v drogérii u kasy) mají nižší index lomu, někde kolem 1.42, rychle žloutnou, občas nedrží a nesnáší ani stopu vody v preparátu, v tom je výhoda etylkyanoakrylátů, protože preparát nemusí být stoprocentně odvodněný. Když jsem se toulal po Mongolsku, tak jsem to dělal i v terénu, když jsem potřeboval zjistit, co jsem to vlastně našel
Projasnění fenolxylenem nebo fenolkanadou jsem taky používal, dobrá věc, štírkům neškodí. Ale pro odbarvení na tuhle metodu se mi nejvíc osvědčilo den před preparací je dát do K2CO3 a nechat je do druhého dne, odbarvení KOH nebo KOH+H2O2 je moc agresivní.
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

bozapetr
Příspěvky: 1052
Registrován: 05 lis 2011, 22:54

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od bozapetr » 25 led 2013, 17:53

dotaz ... s kolegou prosektorem ( přezdívka na fóru ) bychom zkusili naše štírky ... tak se ptám, jestli u našich druhů je nutné to stříbření a podobně ... jestli prostě nestačí dělat jednoduché preparáty ... a pak - kolega prosektor se ptá, zda máš nějakou zkušenost s modernější alternativou kanadského balzámu - solakrylem ... ? on v práci do toho dává trvalé mikroskopické preparáty ...
díky za odpověď

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 27 led 2013, 20:10

bozapetr píše:dotaz ... s kolegou prosektorem ( přezdívka na fóru ) bychom zkusili naše štírky ... tak se ptám, jestli u našich druhů je nutné to stříbření a podobně ... jestli prostě nestačí dělat jednoduché preparáty ... a pak - kolega prosektor se ptá, zda máš nějakou zkušenost s modernější alternativou kanadského balzámu - solakrylem ... ? on v práci do toho dává trvalé mikroskopické preparáty ...
díky za odpověď
To stříbření je dobré u hodně prosvětlených preparátů. Jednoduché preparáty jde samozřejmě dělat, ale pak se hůř určují. Solakryl se mi neosvědčil protože to dlouho trvá. s Kyanoakrylátem můžu preparát po asi 10 minutách dát pod mikroskop, aniž bych se musel bát, že se přilepí. V Solakrylu se mi stalo, že i po týdnu, když jsem nechal preparát na boku, tak štírek stekl ke straně :( Solakryl je kopolymer butylmetakrylátu s metylmetakrylátem rozpuštěným v xylenu a s metakrylátama nemám dobrou zkušenost ani v tom, že po čase žloutnou,to je vidět ve větší vrstvě a štírci se zalévají do Mnohonásobně větší vrstvy, než hystologické řezy. Taky životnost kyanoakrylátů je několikanásobně větší a to nemluvim o indexu lomu - 1.42 x 1.47, a to už je při potřebě vidět kdejaký chlup docela znát. Proces zalévání je v podstatě stejný, nic se nezjednoduší - odvodnit lihem, odvodnit v tomhle případě xylenem a zalít x odvodnit lihem, převést do 7458 a zalít. A já všechno dělám v destičkách na tkáňové kultury, které jsou z polystyrenu a xylen by mi je sežral.
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

bozapetr
Příspěvky: 1052
Registrován: 05 lis 2011, 22:54

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od bozapetr » 27 led 2013, 21:15

To prosektor radost mit nwbuse... :cry

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 27 kvě 2013, 17:40

Pustil jsem se do mikropreparátů. Nějak jsem ztratil praxi a přilepil si vteřiňákem krycí sklíčko k prstu, takže jsem pár minut trávil s prstem ve skleničce s rozpouštědlem a rodina se mohla potrhat smíchy. Ty latexové rukavice jsem opravdu nezmiňoval z legrace :head
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

bozapetr
Příspěvky: 1052
Registrován: 05 lis 2011, 22:54

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od bozapetr » 27 kvě 2013, 18:44

:rofl

Milda
Příspěvky: 296
Registrován: 30 dub 2010, 19:23
Bydliště: Vlkoš u Přerova

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od Milda » 11 čer 2013, 19:40

ahoj, nevíte někdo, co to je zač? Podle takové fotky asi ne, ale kdyby náhodou - dovezl jsem to se dřevem z HR v minulém týdnu.
Přílohy
IMG_0651_w.jpg

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 12 čer 2013, 09:48

čeleď Cheliferidae, druhově podle fotky spíš ne. Předpokládám, že je tak 3 až 4 mm velký. Odkud to je?
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

Milda
Příspěvky: 296
Registrován: 30 dub 2010, 19:23
Bydliště: Vlkoš u Přerova

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od Milda » 12 čer 2013, 10:19

Chorvatsko, okoli Vranskeho jezera ze strany od Pakoštane. Vylezlo mi to z rozpadajicich se vetvi fiku.

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 193
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Mikropreparáty štírků

Příspěvek od tomak » 14 čer 2013, 19:41

Víc to z fotky nedám, To by chtělo pod mikroskop
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

Odpovědět

Zpět na „Preparace hmyzu /Insect preparation/“

Kdo je online

Uživatelé prohlížející si toto fórum: Žádní registrovaní uživatelé a 1 host