Barvení

Vše o preparování hmyzu.. metody, tipy, rady a pomůcky
Odpovědět
Uživatelský avatar
Hali+
Příspěvky: 2365
Registrován: 03 kvě 2010, 06:53
Bydliště: Pardubice

Barvení

Příspěvek od Hali+ » 16 led 2012, 22:51

Prosektor se mě nedávno ptal, čím bych barvil chitin na průhledných aedeagusech. Jedinou metodu co znám (a je smysluplná) je barvení karmínem, viz níže. Nic ostatního není dostatečně dlouho stabilní. On i ten karmín časem povolí, zvláště když je na slunci. Ovšem postup barvení karmínem trvá třeba týdny i měsíce, což není praktické... A také by se pak musel aedeagus dávat do kapičky solakrylu, protože v DMHF je voda a karmín se s vodou nekamarádí...
Také mě napadlo nabarvit chlorazolovou černí všechny membrány kolem a chitinový aedeagus by zůstal průhledný. Čímž bychom de facto měli získat jakýsi "negativ". ;-) Ovšem vyzkoušel jsem to a není to o ničem...
Barvení kyselinou pikrovou se na aedeagy taky moc nehodí, protože maličko naleptá povrch a detailní struktury v ní prakticky zmizí.
Nevíte tedy náhodou o něčem jednodušším, jak nabarvit chitin? Samotného by mě to velice zajímalo, protože by se to mohlo hodit i do mých mikroskopických preparátů. Předem díky.
Přílohy
P1157753_.JPG
P1157752_.JPG
P1157751_.JPG
Haliplidae, Byrrhidae, Clambidae a rod Hydrophilus (svět); E-mail: milanb@seznam.cz

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 207
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Barvení

Příspěvek od tomak » 27 led 2012, 14:08

Eriochromová čerň T, chlorazolová čerň E v kombinaci se safraninem nebo opatrné stříbření.
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

Uživatelský avatar
Hali+
Příspěvky: 2365
Registrován: 03 kvě 2010, 06:53
Bydliště: Pardubice

Re: Barvení

Příspěvek od Hali+ » 29 led 2012, 19:46

Díky. Odkud ty informace jsou?
Haliplidae, Byrrhidae, Clambidae a rod Hydrophilus (svět); E-mail: milanb@seznam.cz

Uživatelský avatar
tomak
Příspěvky: 207
Registrován: 30 dub 2010, 15:02
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Barvení

Příspěvek od tomak » 31 led 2012, 15:21

E-black někde z internetu(nepouzívám), chlorazolová čerň se probírala na foru u Michala a stříbření používám na štírky po extrakci DNA, jsou potom úplně průhlední a stříbření zvýrazní útvary na chitinu (postup jsem popisoval taky u Michala)
Štírci (Pseudoscorpiones) palearktu
Pseudoscorpions of Palearctic ecozone

Petr M.
Administrátor
Příspěvky: 262
Registrován: 29 dub 2010, 12:03
Bydliště: Česká Kamenice

Re: Barvení

Příspěvek od Petr M. » 31 led 2012, 19:12

snad je to ono,tady je návod alá Tom........

Pro ty me stirky pouzivam zasadne media, ktera nemaji po nekolaka letech snahu krystalizovat jako napr. vsemozna chloralhydratova media, PVA laktofenoly apod a jsou dostatecne trvanliva (tedy ne glycerinzelatinu), ani nepotrebuji spoustu prace s uzaviranim a mnohahodinaove sekvence vzestupne rady alkoholu a pak prevod pres fenolxylen apod. Maximalne se mi osvedcil postup, vyvinuty na univerzite v Leidenu pro drobny hmyz. Na PrF UK ho pouzivaji pavoukari a hydrobiologove dlouhodobe k velke spokojenosti.
Potreby:
= bezna mikroskopicka skla
= 85% alkohol
= terpinol (ne terpentyn!!!!), aceton, xylen, hrebickovy olej (ale ten je zbytecne drahy, terpinol staci)
= monomer metylesteru kyseliny akrylove
= Aron Alpha® -Ethyl Ultra Speed Adhesive
napr http://www.emsdiasum.com/microscopy/pro ... esive.aspx
zni to strasne, ale v podstate se jedna o naprosto bezne dostupne prostredky:
= technicky lih
= rozpoustedla
= kapalina z Dentakrylu
= lepsi cyanoakrylatove modelarske lepidlo, cire s dobou tuhnuti 3 - 5 minut
Preparat se odvodnuje pres 70% a 85% lih do terpinolu (nejlepsi postup), xylen a aceton potrebuji jeste 95% alkohol. Terpinol se osusi filtracnim papirem (odsaje se kapka) a preparat se urovna a prevede do monomoer metylmetakrylatu a odtud na sklicko, odsat posledni kapku a nanest cyanoakrylatove lepidlo a zakryt krycim sklickem. Cely proces pro mrnata jako jsou stirci netrva dele nez 2 hodiny:
20 min 85% alkohol, 60min terpinol, 30 min monomoer metylmetakrylatu (nesmi se vytvorit belavy oblacek, kdyz, tak zpatky do terpinolu) a sup na sklicko. Za 3 hod se da udelat tak 40 preparatu. Vsechno delam v nekolika kapkach na podloznich sklickach s jamkou (mozna i mala hodinova sklicka), zadne machani ve zkumavce apod.
Preparat musi zustat ve vodorovne poloze aspon 24 hodin. Pokud je preparat vyssi a hrozila by jeho deformace nebo sikme ulozeni kryciho sklicka, pouzivam male kousky ruzne silneho vlasce na podlozeni kr. sklicka. Samozrejmosti je popsani preparatu.
Pro odbarveni preparatu pouzivam 10% K2CO3, pri KOH se ztraceji jemne sety na pedipalpach, ktere jsou jednim z diagnostickych kriterii. Pokud potrebuju dobarvit, pouzivam eriochromovou cern nebo postup stribreni s dusicnanem stribrnym:
lugoluv roztok (lekarna)
AgNO3 - 10% roztok
tekuta vyvojka AGFA Rodinal (prodava se pod mnoha ruznymi nazvy)
kysely ustalovac, voda
preparat necham na 10 - 15 minut v lugolove roztoku, oplachnu a prevedu do dusicnanu stribrneho (ve tme) na 15 minut. Potom necham na filtracnim papiru osusit pod silnou zarovkou (expozice) asi 2- 5 minut (vyzkouset) a prendam asi na 90 vterin do Rodinalu 1:3, oplachnout vodou a sup s tim do ustalovace, promyt a oplachnout vodou, prevest do 65% alkoholu atd. - proste normalni postup pro cernobile fotografie.
Vsechno se da koupit v http://www.sandragon.cz/, cyanoakrylatove lepidlo v jakemkoliv modelarskem obchode.
Cyanoakrylaty maji pro pozorovani ruznych chlupu a struktur na chytinu idealni index lomu 1.4363, pokud je treba tyto struktury zvyraznit, je stribreni idealni rychly a levny postup.
Pri praci s lepidlem je treba si dat bacha na prsty a neprilepit si sklicko k palci nebo loket ke stolu, to by byl docela prusvih. A jeste, bez preparacni lupy nebo binokularu (10x az 30x) bych to nedelal, je dobre na to videt.
Redeni vseho je jen odo oka, pouzivam nasycene roztoky a kapkovou metodu:
10% AgNO3 - 9 kapek vody a jedna kapka nasyceneho roztoku AgNO3 blizko sebe na sklicko, shrnout krycim sklickem a skapnout do jamky na podloznim skle s preparatem ... Nema cenu se s tim moc s...
TomaK
Petr Matúšových

Uživatelský avatar
Hali+
Příspěvky: 2365
Registrován: 03 kvě 2010, 06:53
Bydliště: Pardubice

Re: Barvení

Příspěvek od Hali+ » 31 led 2012, 19:58

Mno... Děkuji moc, ale obávám se, že tohle Prosektorovi asi moc nepomůže. Stříbro nabarví stejně dobře chitin jako membrány, takže by na pindících Heterocerů asi stejně mnoho neviděl, protože ty průhledné jsou namotané ve změti membrán...
Ale je to zajímavé, zvlášť ten uhličitan draselný na jemné odbarvování možná někdy využiju. Naštěstí já mám na odbarvování jen masivní chitinové kusy, tak se mi osvědčil čerstvě namíchaný KOH v 5% peroxidu. Jen se musí dávat bacha, aby se to neodbarvilo moc, je to fofr... ;-)
Haliplidae, Byrrhidae, Clambidae a rod Hydrophilus (svět); E-mail: milanb@seznam.cz

Uživatelský avatar
Hali+
Příspěvky: 2365
Registrován: 03 kvě 2010, 06:53
Bydliště: Pardubice

Re: Barvení

Příspěvek od Hali+ » 04 úno 2014, 20:34

Máte někdo zkušenosti s barvivem "Lignin pink"?
Lignin pink je červené barvivo, které rychle barví subkutikulární tkáně, viz příloha.
Rád bych ho využil na barvení samičích genitálií, např. ve směsi s chlorazolovou černí.
Přílohy
Kořínek_2005-Dichotomický klíč perlooček Cladocera ČR_plus preparáty a barvení.pdf
(794.15 KiB) Staženo 246 x
Haliplidae, Byrrhidae, Clambidae a rod Hydrophilus (svět); E-mail: milanb@seznam.cz

JAKUB
Příspěvky: 193
Registrován: 10 čer 2010, 19:21
Bydliště: Praha
Kontaktovat uživatele:

Re: Barvení

Příspěvek od JAKUB » 06 úno 2014, 10:44

zkoušel jsem na doporučení "Kongo červeň" a docela spokojenost, s trvanlivostí jsem se moc nezabejval, takže nevím.....
cleridae a fulgoridae kolem koule

Uživatelský avatar
Hali+
Příspěvky: 2365
Registrován: 03 kvě 2010, 06:53
Bydliště: Pardubice

Re: Barvení

Příspěvek od Hali+ » 07 úno 2014, 15:01

Kongo červeň je pro moje účely bohužel téměř nepoužitelná.
Zatím jsem se proto dopracoval k tomuto... :mrk A jelikož jsem tvrdohlavý, tak už vím jak to vypadá a pátrám dále...

http://www.bioquip.com
lignin pink stain
http://www.bioquip.com/html/download_catalog.asp
Přílohy
6377A-001-Lignin-Pink-Stain.jpg
Haliplidae, Byrrhidae, Clambidae a rod Hydrophilus (svět); E-mail: milanb@seznam.cz

Odpovědět

Zpět na „Preparace hmyzu /Insect preparation/“

Kdo je online

Uživatelé prohlížející si toto fórum: Žádní registrovaní uživatelé a 1 host